Как вылечить стрептококковую инфекцию. Методы проведения анализа на стрептококковую инфекцию

Род Streptococcus, семейство Streptococcaceae включает 21 вид. Чаще всего вызывают заболевания: S.pyogenes, agalacticae, faecalis, зеленящие (pneumoniae).

Пиогенные стрептококки

Морфология. Гр+, шаровидной или овальной формы. В мазках располагаются парами или короткими, 6–8 клеточными, цепочками. Имеют капсулу, но входящая в ее состав гиалуроновая кислота не антигенна. Неподвижны, спор не образуют.

Стрептококки КУЛЬТИВИРУЮТСЯ на питательных средах с добавлением глюкозы, сыворотки или крови. На поверхности плотных сред образуют мелкие (до 1 мм)бесцветные колонии, в жидких средах – придонный, пристеночный рост, при этом среда прозрачная. По характеру роста на кровяном агаре различают: бета-гемолитические – вокруг колоний образуется прозрачная зона гемолиза; альфа-гемолитические – неширокая, зеленоватая зона; негемолитические – среда не изменяется.

Продуцируют ряд ферментов, дифференциально-диагностическое значение имеет лактаза и сахараза.

АГ . По АГ составу полисахоридной клеточной стенки (субстанция С) стрептококки разделяют на 20 серогрупп (обозначают заглавными буквами латинского алфавита А–V). Внутри серогрупп стрептококки разделяют на серовары (обозначают цифрами). Большинство возбудителей стептококковых инфекций относится к серогруппе А.

АГ свойствами обладают Ig-новые Fc-рецепторы клеточной стенки, липотейхоевые кислоты, а также токсины и ферменты, секретируемые в окружающую среду при размножении микроорганизмами. Патогенность для человека определяется образованием токсинов, внеклеточных ферментов и свойствами самих бактериальных клеток. Перечень заболеваний, вызываемых стрептококками, довольно большой: ангины, хронический тонзиллит, скарлатина, гнойные поражения кожи, флегмоны, сепсис, нефрит, ревматизм, отит и др. Попытки найти дифференциальные признаки стрептококков, вызывающих столь разнообразные по клиническим проявлениям болезни, оказались безуспешными. Только в отношении скарлатинозного стрептококка установлено, что они могут выделять эритрогенный токсин, другие признаки одинаковы с другими стрептококками СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ГРУППЫ А . Нефритогенными считаются стрептококки серовара 12, продуцирующие цитотоксин.

Стрептококки серогруппы В (S. agalactia) могут вызывать послеродовые инфекции и сепсис новорожденных, эрозивный стоматит, урогенитальные инфекции у женщин, сепсис, менингит.

С – возбудители респираторных инфекций, заболеваний МПС.

Н и К – выделены при эндокардитах.

D (энтерококки) – обитают в кишечнике здорового человека, вызывают поражения желчевыводящих путей, могут вызвать эндокардит, попадая в раны гнойно-воспалительную инфекцию. При генерализации – сепсис.

Некоторые (S.mutans, S.salivarius и др.), не содержащие группового Аг, обитают в полости рта. S.mutans участвует в развитии кариеса зубов и пародонтоза.

Стрептококки других серогрупп редко обнаруживаются у человека.

Факторы патогенности . Адгезины – это липидный компонент комплекса липотейхоевой кислоты с белками клеточной стенки, обеспечивают взаимодействие с мембраной эпителия и колонизацию. Защиту от фагоцитоза обеспечивают:

1) антихемотаксический фактор;

2) Ig-новый Fc-рецептор (к IgG) – подавляет фагоцитоз, разрушает комплемент, вызывает дисбаланс иммуноглобулинов;

3) капсула (у серогрупп А и В) – защищает от фагоцитов;

4) М-белок , позволяет расти и размножаться в крови человека, лишенные М-белка клетки фагоцитируются без участия антител. М-белок обеспечивает т/же способность проникать в клетки микроорганизмов и размножаться в них.

ФЕРМЕНТЫ: гиалуронидаза (фактор распространения) и стрептокиназа (фибринолизин) – разрушает фибрин, ограничивающий местный очаг воспаления, способствуя генерализации процесса.

Стрептококки СЕРОГРУППЫ А образуют ряд ТОКСИНОВ:

О-стрептолизин (термолабильный белок) – выделяется при размножении, вызывает лизис эритроцитов, разрушает мембраны других клеток, а также мембраны лизосом, обладает кардиотоксическим действием. Этот токсин является АГ и стимулирует синтез анти-О-стрептолизин.

S-стрептолизин (нуклеопротеид), антигенными свойствами не обладает, вызывает лизис эритроцитов, разрушает лизосомы, мембраны митохондрий клеток человека.

Лейкоцидин лизирует полиморфноядерные лейкоциты, выключает фагоцитоз.

Цитотоксины (пептиды) – повреждают клетки. Один из этих токсинов способен повреждать почечную ткань, он выделяется нефритогенными штаммами стрептококков серовара 12.

Эритрогенный токсин (скарлатинозный) . Информация об образовании данного токсина поступает в клетку с геномом умеренного фага. Термостабильная фракция эритрогенного токсина стимулирует реакцию ГЗТ.

Экология и распространение . Выделяют возбудителей заболеваний только человека, человека и животных и условно-патогенные для человека. Обитают в полости рта, на слизистых оболочках верхних дыхательных путей, на коже, в кишечнике. Источник – больные и бактерионосители. Путь распространения – воздушно-капельный. Значительная часть заболеваний – эндогенные инфекции, возникают у лиц с иммунодефицитными состояниями.

В окружающей среде (на предметах обихода, в пыли) могут сохраняться в течение нескольких дней, хорошо выдерживают высушивание (сохраняют жизнеспособность, но теряют вирулентность). Чувствительны к нагреванию и дезинфектантам.

Иммунитет . На развитие стрептококковых инфекций влияет состояние микроорганизмов. Часто заболевание развертывается на фоне предварительно возникшей сенсибилизации (повторные ангины, рожистые воспаления, хронические инфекции – тонзиллит, нефрит, ревматизм). Возможно участие аутоиммунных процессов (ревматизм). Имеют АГ, перекрестно реагирующий с сарколеммой мышечных волоконсердца.

Антитела вырабатываются на все БАВ стрептококка (токсины, ферменты). Иммунитет после перенесенных инфекций (кроме скарлатины) малонапряженный и носит типовой антимикробный характер (к М-антигену). Антитела к ферментам, токсинам стрептококков протективными свойствами практически не обладают. Уровень напряженности сенсибилизации проверяют в аллергических пробах.

Лабораторная диагностика . Материалом для БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО исследования служат слизь из зева, гной, отделяемое ран, кровь и др. Выделенные чистые культуры идентифицируют, определяют основные их свойства: морфологию, гемолитическую активность, чувствительность к антимикробным препаратам.СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА – выявление антител к токсинам и ферментам. При ревматизме – нарастание титров анти-О-стрептолизинов, анти-ДНКазы, антигиалуронидазы в парных сыворотках.

Профилактика и лечение . Специфическая профилактика не разработана. Для предупреждения хронических стрептококковых инфекций, связанных с персистенцией возбудителя и образованием L-форм, используют антибиотикотерапию. За детьми, перенесшими повторные ангины, скарлатину, устанавливается диспансерное наблюдение (профилактика ревматизма). Стрептококки серогруппы А высокочувствительны к пенициллину (бактерицидное действие), устойчивость к пенициллину не приобретается. Сульфаниламиды оказывают бактериостатическое действие на стрептококки. К ним микроорганизмы легко приобретают резистентность.

Особое место занимает СКАРЛАТИНА – острое инфекционное заболевание, возбудитель – гемолитический стрептококк группы А любого серовара , способный продуцировать эритрогенный токсин.

Патогенез . Скарлатина – острозаразное заболевание, протекает циклически со сменой симптомов. На 1 этапе проявляется действие эритрогенного токсина (интоксикация, ангина, мелкоточечная сыпь на гиперемированном фоне).

2 период сопровождается осложнениями в рез действия самих стрептококков (гнойные лимфаденит, мастоидит, отит), т.к. антимикробный иммунитет не выражен, и заражение стрептококками других сероваров , к которым нет соответствующих антител.

Иммунитет. В отличие от других стрептококковых инфекций остается прочный антитоксический иммунитет, т.к. эритрогенный токсин стрептококков всех сероваров АГ-но идентичен. Антимикробный иммунитет типоспецифичен и не защищает от возникновения других стрептококковых заболеваний.

Напряженность антитоксического иммунитета к эритрогенному токсину проверяется внутрикожными пробами. При отсутствии иммунитета самая малая доза токсина дает покраснение и припухлость кожи. Если же в крови есть антитоксины, реакции на введение токсина не возникает.

Стрептококки пневмонии (ПНЕВМОКОККИ). S.pneumoniae – вызывают воспаление легких – пневмонию, что объясняется специфичностью адгезинов, взаимодействующих с рецепторами клеток лёгких.

Морфология, физиология . Им вытянутую форму, напоминающую пламя свечи. Располагаются попарно, каждая пара окружена капсулой. Под капсулой расположен М-белок, по свойствам схожий с S.pyogenes, но имеющий свою АГ специфичность.

На плотных питательный средах, в которые добавлена сыворотка или кровь, пневмококки растут, образуя мелкие колонии, окруженные зоной позеленения (на кровяном агаре). В жидких средах дают равномерную муть.

БХ активность выражена умеренно – расщепляют ряд углеводов и образуют гиалуронидазу, муромидазу, пептиназу.

Имеют 3 основных АГ : полисахаридный АГ клеточной стенки, капсульный антиген и М-белок. По капсульному АГ разделяются на 84 серовара.

Экология и распространение . Обитают в верхних дыхательных путях человека, попадают в нижние дыхательные пути и при застойных явлениях в легких, снижении активности SIgA и макрофагов, разрушении сурфактанта возникает эндогенная пневмония. Заражение воздушно-капельным путем.

Вне организма пневмококки быстро погибают. Они не выдерживают нагревания, дезинфекции. В высушенной мокроте могут сохраняться длительное время. Чувствительны к пенициллину, макролидам.

Патогенность . Образуют гемолизины и лейкоцидин, повреждающие клетки тканей. М-белок и капсула обеспечивают способность к адгезии и устойчивость к фагоцитозу. Выделяющиеся ферменты играют большую роль в развитии патологического процесса: пептидаза расщепляет SIgA, гиалуронидаза способствует распространению микроорганизмов в тканях. При воздействии токсинов и ферментов макрофаги под сурфактантом могут покинуть «линию обороны». Возможна генерализация процесса, которая чаще бывает у детей раннего возраста и пожилых людей. В этих случаях возникают менингит, сепсис.

Иммунитет . Типоспецифический и нестойкий, это объясняет повторное возникновение и возможность перехода в хроническую форму.

Лабораторная диагностика . Для выделения клеток возбудителя необходимо: оптимальная для размножения питательная среда, условия культивирования, правильное взятие исследуемого материала. Выделенные клетки идентифицируют по ряду признаков и дифференцируют от зеленящего (альфа-гемолитического) стрептококка, энтерококков. Пневмококки, имеющие капсулу, подвергают серологическому типированию и определяют чувствительность микроорганизмов к антимикробным препаратам.

Профилактика и лечение . Специфическая профилактика не разработана. В каждом частном случае имеют значение неспецифические мероприятия, направленные на предупреждение возможности возникновения эндогенной инфекции: у больных, вынужденных длительное время лежать, находящихся на гормональной, лучевой терапии, и при снижении общей резистентности организма проводится стимуляция естественных защитных механизмов (режим питания, витаминизация, усиление вентиляции легких массажем и прочими воздействиями). Для лечения пневмонии используют пенициллин, макролидные антибиотики.

ЭНТЕРОКОККИ. S.faecalis (фекальные стрептококки, энтерококки) являются обитателями кишечника человека и теплокровных животных. Входят в группу D .

Морфологически – это шаровидные или овальные бактерии, при делении соединяются в пары или короткие цепочки. Полиморфны, некоторые штаммы подвижны, имеют 1–4 жгутика.

Ферментация отдельных углеводов – непостоянный признак.

Экология и распространение . Энтерококки более устойчивы к действию факторов окружающей среды, чем другие стрептококки. Они выдерживают нагревание до 60°С в течение 30 мин, способны размножаться в средах с 6,5 % NaCI, 40% желчи, при рН 9,5–10,0. Теллурит калия, азид натрия, желчные соли, кристаллический фиолетовый, налидиксовая кислота, а также пенициллин, неомицин не угнетают роста энтерококков, что используется для создания элективных питательных сред.

Патогенез . Способны размножаться в пищевых продуктах, при употребление зараженной пищи развивается пищевая токсикоинфекция. Чаще ее вызывают протеолитические варианты.

Гнойно-воспалительные процессы протекают обычно вяло, хронически. Чаще возникает не моноинфекция, а смешанная, в ассоциации с кишечной палочкой, протеем, стафилококками. Из гноя, отделяемого ран, верхних дыхательных путей, где локализуются патологические процессы, выделяются гемолитические варианты S.faecalis.Большинство штаммов энтерококков, выделяемых от больных, оказываются устойчивыми к пенициллину, неомицину, обладают ферментами патогенности – коагулазой, гиалуронидазой, ДНК-азой, фибринолизином, протеиназой, муромидазой. При пересевах в лаборатории эти ферменты обычно перестают выделяться

> Обследование на стрептококковую инфекцию

Данная информация не может использоваться при самолечении!
Обязательно необходима консультация со специалистом!

Существует несколько видов стрептококков, вызывающих у человека воспалительные процессы в организме. Особенно опасен бета-гемолитический стрептококк группы В. Эта бактерия обитает в носоглотке, желудочно-кишечном тракте, влагалище. Выделяют три ее серовара (подвида). Стрептококки сероваров 1а и III обитают преимущественно в дыхательных путях и центральной нервной системы. Они могут вызывать менингиты и пневмонии у новорождённых, поэтому беременным на сроке 35 недель назначают анализы для выявления данных микроорганизмов. Бета-гемолитический стрептококк группы А обитает преимущественно на кожных покровах и слизистых оболочках. Вызывая воспаление и вырабатывая множество токсинов (гемолизин, стрептолизин и др.), он может вызывать ангины, фарингиты, а также инвазивные заболевания (миозиты, эндокардиты и др.), скарлатину и даже токсический шок.

Из лабораторных методов для выявления стрептококков применяют ПЦР-тестирование (выявление ДНК возбудителя). Материалом для исследования являются плазма крови, соскоб эпителиальных клеток ротоглотки, слюна, мокрота, смывы и удаленная из легких (лаважная) жидкость. Выбор вида биоматериала для исследования осуществляет врач в зависимости от предполагаемой колонизации стрептококка.

Для подтверждения стрептококковой природы заболевания, эффективного назначения лечения и подтверждения выздоровления проводят посев материала для обнаружения бета-гемолитических стрептококков с последующим определением их чувствительности к антимикробным препаратам.

Также для выявления стрептококков групп А и В проводят специальные антигенные тесты. Для выявления данным способом стрептококка А у пациента берут для анализа мазок из ротоглотки.

Показания к исследованию на стрептококк

Анализ крови на выявление ДНК стрептококка врачи назначают при септических состояниях, менингитах, острых стадиях пневмоний. ПЦР-тестирование соскобов эпителия ротоглотки, мокроты, смывов и лаважной жидкости проводят при длительном влажном кашле, сопровождающемся лихорадкой, бронхитах, тонзиллитах, фарингитах, риносинуситах. Исследования на стрептококк показаны пациентам с бронхолегочными заболеваниями на фоне сниженного иммунитета, беременным, медицинским работникам для оформления личной медицинской книжки.

Назначают анализы, выявляющие наличие стрептококка, акушеры-гинекологи, педиатры, терапевты, неврологи, пульмонологи, хирурги. Исследования проводят как в многопрофильных больницах, так и во многих платных лабораториях.

Подготовка к исследованию

Желательно сдавать анализы до начала лечения антибиотиками. Забор слюны, мокроты, смывов, лаважной жидкости и материала из ротоглотки следует производить до проведения диагностических и лечебных мероприятий в данных областях. Пить и принимать пищу следует не позднее чем за 2–3 часа до сбора материала из ротоглотки.

Интерпретация результатов анализов

Результаты ПЦР-теста и антигенных тестов на наличие стрептококков групп А и В лаборатория выдает в форме «обнаружено» или «не обнаружено». Отрицательный результат чаще всего свидетельствует об отсутствии заражения, реже - о недостаточной концентрации возбудителя или его антигенов в образце биоматериала. В норме в исследуемых тканях ни ДНК стрептококка, ни его антигенов обнаружено быть не должно. Однако носителями стрептококков могут быть и здоровые люди.

При обнаружении роста бета-гемолитических стрептококков групп А и В при посеве врач указывает вид микроорганизмов, количество выросших колоний и чувствительность их к определенным лекарственным средствам. В норме рост стрептококков должен отсутствовать.

При локальных капельных стрептококковых инфекциях материалом для исследования является мокрота, носо-глоточная слизь, гной, полоскательные смывы, раневое отделяемое, при распространенных формах инфекционного процесса - кровь и моча.

Для лабораторного анализа используются микроскопический, бактериологический и серологический методы диагностики.

Назначение, особенности и диагностическая ценность микроскопического исследования такие же, как и при стафилококковых инфекциях.

1. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Для выделения чистой культуры стрептококков важное значение имеет создание оптимальной питательной среды, так как стрептококки предъявляют к ней особые требования. Им необходимо значительное количество углеводов и нативного белка. Поэтому наряду с общепринятыми сахарным МПБ, кровяным МПА, молочно-солевым МПА и МПБ (см. рецепты выше) при стрептококковых инфекциях применяются асцитические и сывороточные среды.

АСЦИТИЧЕСКИЙ МПБ И МПА готовятся с добавлением отчетной жидкости, получаемой стерильно из брюшной полости больных терапевтического и хирургического профиля. Жидкость прогревают 3 дня при +56-58 °C по 1 часу, стерилизуют фильтрованием через фильтр Зейтца или добавляют 40% глицерина и хранят на холоду. Для приготовления асцит-бульона и асцит-агара 1 часть жидкости смешивают с 2-3 частями МПБ (или Хоттингеровского бульона) или растопленного и остуженного МПА.

СЫВОРОТОЧНЫЙ МПБ готовят из простого свежего мясопептонного бульона с pH 7,6, к 1 части которого добавляют 2 части свежей сыворотки человека или лошади. Сыворотку перед прибавлением к среде инактивируют при + 56 °C в течение 30 минут.

При осложнении капельных стрептококковых инфекций сепсисом необходим и посев крови. Для бактериологического исследования крови Э. Г. Кассирская рекомендует комплексное использование трех видов питательных субстратов, засеваемых из расчета 1 часть патологического материала на 10-15 частей среды. В качестве последней используются 0,2% полужидкий агар с 10% асцитической жидкости, бульон Левинталя с кровью и печеночная среда Китт-Тароцци.

ДЛЯ БУЛЬОНА ЛЕВИНТАЛЯ отдельно готовят следующие компоненты: № 1 - к 100 мл мясного фарша добавляют 300 мл дистиллированной воды и 10 мл нормального раствора соды; № 2 - 0,5 г панкреатина растворяют в 20-30 мл воды с 2 мл 1 N раствора соды и 10 мл хлороформа; № 3 - буферный раствор фосфорно-кислого натрия в дистиллированной воде (разведение 8:1000). С помощью раствора НСl устанавливают pH, равное 5,6-6.

В первый день смесь № 1 инкубируют в термостате при + 37 °C 1-2 часа, добавляют к ней раствор № 2, перемешивают и при тех же условиях выдерживают еще 24 часа. Сосуд со средой периодически встряхивают. После этого берут равные количества мясной кашицы и буферного раствора № 3. Кипятят, фильтруют. Устанавливают рН-7,2-7,4. Вновь кипятят. Разливают по пробиркам и стерилизуют 2 дня подряд по 30 минут текучим паром.

СРЕДУ КИТТ-ТАРОЦЦИ готовят из говяжьей печени или мяса. Последние нарезают кусочками, взвешивают, заливают тройным количеством МПБ (рН-7,4-7,6) кипятят 30 минут. Затем бульон фильтруют, кусочки печени отмывают водопроводной водой. Далее пробирки с 3-4 кусочками печени, залитыми 7-8 мл фильтрата и слоем вазелинового масла, стерилизуют под давлением 1 атм. в течение 30 минут.

Высеваемость стрептококков возрастет при использовании ПОЛУЖИДКОГО АГАРА ГАРОЦЦИ: в бульон Мартена (рН-7,6-7,8) добавляют 0,3-0,5% глюкозы и 0,1-0,15% агар-агара. В стерильные пробирки помещают кусочки печени или вареного мяса, добавляют по 9 мл среды и стерилизуют при температуре +120 °C в течение 30 минут.

Зеленящий стрептококк, выделяемый при септическом эндоркардите, развивается очень медленно. В связи с этим посевы крови выдерживают 2-3 суток в термостате.

В некоторых случаях выделить культуру стрептококка при широкой аэрации не удается. Более успешным оказывается применение анаэробиоза. Для создания последнего можно использовать три простейших способа.

I. ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ ЗАСЕВАЮТ В ПРОБИРКУ с 0.25% глюкозным бульоном и быстро всасывают его в стерильные пастеровские пипетки, концы которых тотчас же запаивают над пламенем горелки. Пипетки устанавливают вертикально в термостате. Через 24 часа нижние концы пипеток отламывают (стрептококки растут только внизу), первые капли используют для микроскопии и дальнейшего выделения чистой культуры возбудителя.

2. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ПОСЕВОВ В АТМОСФЕРЕ, НАСЫЩЕННОЙ УГЛЕКИСЛЫМ ГАЗОМ. Необходимую концентрацию СО 2 получают при добавлении в загруженный пробирками эксикатор вначале 1г двууглекислой соды на 1 литр объема, а затем из того же расчета 8-9 мл 10% Н 2 SO 4 или HCl.

3. ДОВОЛЬНО ПРОСТ и менее эффективен следующий прием: на дно неплотно закрытого эксикатора ставят зажженную свечку. Она горит 1-3 минуты и гаснет. По окончании первой или второй процедуры эксикаторы покрывают крышками, края которых смазаны вазелином и помещают в термостат.

Выделение чистой культуры

Биохимическая активность стрептококков непостоянна и ее выяснение не имеет диагностического значения. Изучение стрептококков в этом плане используется лишь для дифференциации с энтерококками (табл. 1.).

Состав дифференциально-диагностических сред, применяемых для этой цели следующий.

• ЖЕЛЧНЫЙ И ЖЕЛЧНО-КРОВЯНОЙ МПА Д. 3. Беленького и Н. Н. Поповой готовятся из расплавленного и отфильтрованного 3% МПА с любой бульонной основой. К 60 мл этого МПА добавляют 40 мл нативной профильтрованной желчи, разливают по флаконам и стерилизуют при давлении в 1 атм. 30 минут. Для приготовления агара с кровью к этому желчному МПА добавляют 5% дефибринированной крови.
• МОЛОКО С МЕТИЛЕНОВЫМ СИНИМ приготовляется из обезжиренного стерильного молока, к 100 мл которого добавляют 2 мл 10% водного раствора метиленового синего.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИРУЛЕНТНОСТИ СТРЕПТОКОККОВ

Для доказательства патогенности стрептококков важное значение имеют гиалуронидазная активность, выявление стрептокиназы или фибринокиназы, плазмокоагулазы, лейкотоксическое действие стрептококка, наличие гемолизина. Определение этих показателей осуществляется по методикам, описанным выше, но выявление гемолизирующей активности стрептококка лучше идет на средах с человеческой кровью.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛЕЙКОЦИДИНА. Берут цитратную кровь человека или какого-либо животного, центрифугируют, верхний желтый слой лейкоцитов отсасывают пипеткой, переносят в другую пробирку и готовят 2-5% лейкоцитарную взвесь. Последнюю разливают по 1-1,5 мл в узкие пробирки. Сюда же вносят 1 петлю 1-2 млрд. суточной культуры стрептококка и на 1 час помещают в термостат при +37 °C. После инкубации, из лейкоцитарно-микробной массы делают мазки (по типу мазков из цельной крови), высушивают, фиксируют 15 мин. в смеси Никифорова, окрашивают 45-60 минут по Романовскому-Гимза, микроскопируют. Массовое разрушение лейкоцитов свидетельствует о наличии лейкоцидина.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ выделенных культур к лекарственным веществам производится общепринятыми способами.

СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ТИПИЗАЦИЯ обнаруженных стрептококков после их изоляции требуется только для особых эпидемиологических целей и применяется редко.

II. СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ СТЕПТОКОККОВЫХ ИНФЕКЦИЙ

Ферменты вирулентности стрептококков (гиалуронидаза, фибринокиназа, плазмокоагулаза) и их токсины (например, гемотоксин) являются мощными антигенами, в ответ на действие которых вырабатываются соответствующие антитела: антигиалуронидаза, антистрептокиназа, антистрептолизин и т. д. По обнаружению этих антител можно диагностировать заболевание и фазу развития инфекционного процесса.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИСТРЕПТОЛИЗИНА (АНТИГЕМОЛИЗИНА)

Стрептолизин представляет собой разновидность гемотоксина. Его присутствие проверяют на эритроцитариой массе. В ответ на действие этого антигена в организме формируются антитела, способные нейтрализовать его гемолизирующую активность. При выявлении антистрептолизина необходимы: сыворотка больного с антистрептолизинами (антителами); стрептолизин (очищенный), стандартный, лиофилизированный; 5% взвесь кроличьих, бараньих или человеческих эритроцитов; фосфатный буфер для разведения сывороток и приготовления взвеси эритроцитов: в 1 л дистиллированной воды растворяют 7,6 NaCl, 3,17 г КН 2 Р0 4 и 1,81 г Na 2 HPO 4 , добавляют по каплям концентрированную NaОН и доводят pH до 6.5-6,7. Буферный раствор сохраняется в рефрижераторе при -4 °C 2-3 недели.

Определение антистрептолизина складывается из двyx этапов: первый - установление титра и рабочей дозы стандартного стрептолизина, второй - выявление и количественное определение антистрептолизина. Схемы их выполнения приводятся ниже.

Титром и рабочей дозой стрептолизина считается его минимальное количество, давшее четкий гемолиз эритроцитов. В данном примере они равны 1,0 мл.

В последнее время выпускается стандартный лиофилизированный стретолизин, на флаконе с которым и в приложенной инструкции указан способ разведения препарата для получения рабочей дозы. Такой стрептолизин обеспечивает хорошую повторяемость результатов.

Антистрептолизин в данной пробе сыворотки обследуемого больного обнаружен в титре 1:200.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИГИАЛУРОНИДАЗЫ

Принцип выявления основан на регистрации разрушительного действия фермента гиалуронидазы на гиалуроновый субстрат. Антитела сыворотки больного, направленные против этого фермента, нейтрализуют его и гиалуроновая кислота остается неизмененной.

Необходимые реактивы: сыворотка больного с антителами (антигиалуронидазой); экстракт гиалуроновой кислоты с известной рабочей дозой (способ описан выше); гиалуронидаза (химически чистый препарат); 15% уксусная кислота - индикатор; физиологический раствор.

Определение антигиалуронидазы состоит из трех этапов: первый - определение титра и рабочей дозы гиалуроновой кислоты, второй - гиалуронидазы, третий - выявление наличия и титра антигиалуронидазы.

Титрование гиалуронового субстрата описано выше. Титр и рабочая доза стандартной гиалуронидазы соответствует тому минимальному ее количеству, которое способно разрушить гиалуроновую кислоту, взятую в рабочей дозе.

После выяснения титра гиалуронидазы проводят определение титра антигиалуронидазы.

В данном примере титр антигиалуронидазы в сыворотке крови больного 1:200. Это количество антител при указанном разведении сыворотки еще обладает нейтрализующим действием в отношении гиалуронидазы и предотвращает разрушение гиалуроновой кислоты. Ее целостность регистрируется по образованию сгустка после добавления индикатора - 15% раствора уксусной кислоты.

1. Дяченко С. С. Микробиологические методы диагностики инфекционных заболеваний. Госмедиздат УССР, стр. 313.
2. Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных заболеваний. Изд. «Медицина», т. VI, разд. VI, стр. 440-474, 489-500 (энтерококки).
3. Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней под ред. К. И. Матвеева и М. И. Соколова, стр. 450.
4. Сачков В. И. Иммунологические методы изучения ревматизма и других коллагенозных заболеваний. Медгиз, М., 1962.
5. Иоффе М. Ф. Иммунология ревматизма. Медгиз, М., 1961.

Источник : Мотавкина Н.С., Пьянова Р.Е. Микробиологическая диагностика некоторых капельных инфекций и токсоплазмоза. Методическая разработка для студентов. ВГМУ, 1973

Инфекционные заболевания вызывают самые разные микроорганизмы, среди них немалую долю занимают бактерии. В частности, стрептококки. Это шаровидные, грамположительные, анаэробные бактерии, которые живут, преимущественно, на слизистых человека. Анализ на стрептококковую инфекцию назначают во многих случаях, это единственное средство выявить возбудителя при подозрении на бактериальную причину заболевания.

В каких случаях проводят диагностику? Прежде всего, при ангине и фарингите, некоторых других заболеваниях верхних дыхательных путей. Выявление бактерий проводится при инфекционных болезнях кишечника, в ряде случаев, при инфицировании мягких тканей, костей, сепсисе.

Кроме того, лабораторная диагностика стрептококковых инфекций назначается при подозрении на бактерионосительство, соскоб берется у сотрудников медицинских учреждений.

При внутрибольничной инфекции анализ на стрептококк проводится в обязательном порядке, наряду с выявлением других патогенных бактерий.

Анализы также делают при лечении антибиотиками, для оценки эффективности терапии. Может быть назначено обследование перед госпитализацией, в качестве профилактики.

Методы диагностики

Сегодня для выявления возбудителя могут использовать различные исследования. Наиболее часто используются такие методы:

• бактериологический;
• серологический;
• экспресс-тестирование;
• ПЦР-диагностика.

Каждый из этих методов имеет свою специфику и возможности, хотя в плане точности все они одинаково информативны.

Бактериологический метод

Он же называется посевом. При исследовании взятый у пациента биоматериал помещают в чашку Петри с питательной средой – смесью углеводов и нативного белка. Для посева используется три разных вида субстрата, каждый из которых подходит для определенного вида бактерий.

Далее чашки Петри помещают в специальный термостат и выдерживают в нем определенное время. После этого изучают результат – на питательных средах образуются колонии бактерий. Как правило, стрептококки образуют круглые колонии, которые могут быть матовым, блестящими или слизистыми – зависит от группы бактерий.

Такой анализ проводится для выделения отдельного возбудителя из группы – ведь в каждом биоматериале есть множество микроорганизмов, патогенных или нет. Понятно, что если колоний стрептококка больше всего, то и болезнь вызвана именно им.

Разновидность бактериологического анализа – анаэробиоз. Биоматериал помещают в пробирку с питательным бульоном, но без доступа кислорода. В этих условиях могут развиваться только анаэробные бактерии, к которым и относятся стрептококки. Преимущество в том, что сразу отсекаются все аэробные микроорганизмы, а это повышает точность диагностики и упрощает ее в несколько раз.

Серологический метод

Он тоже используется для определения инфицирования стрептококком, но во внимание берется не количество возбудителя, а количество антител к нему. Как известно, в организме человека к любому микроорганизму вырабатываются антитела, которые устраняют опасность. Чем больше их в крови, тем больше бактерий. На этом и основано серологическое исследование.

В случае со стрептококком определяется количество антител к стрептолизину типа О, который выделяется этими бактериями. Именно это вещество вызывает разрушение клеток организма человека.

В зависимости от выявленного количества антител можно понять не только причину заболевания, но и степень выраженности воспалительного процесса – чем их больше, тем больше стрептококков в организме.

ПЦР

Аббревиатура расшифровывается, как полимеразная цепная реакция. Это относительно новый метод, который славится своей точностью. Исследование основано на выявлении специфических фрагментов ДНК стрептококка. Если при исследовании обнаруживается та последовательность генов, которая характерна именно для этого возбудителя, сомнений не остается.

Каким образом это удается? ПЦР позволяет много раз создавать копии ДНК, с помощью фермента ДНК-полимеразы. При этом возможно выявить возбудителя на самых ранних стадиях заболевания, определить его количество в биоматериале. Метод действительно информативный, в этом плане он превосходит все другие.

Недостатком полимеразной цепной реакции является более высокая стоимость анализа, но она компенсируется исключительной точностью, что во многих случаях критично.

Быстрая диагностика

Если тест на стрептококк нужно сделать быстро, а такое требуется во многих случаях, оптимальным вариантом будет взятие мазка с последующей экспресс-диагностикой. Она позволяет поставить диагноз уже через 5 минут и не доставляет каких-либо серьезных неудобств.

Как и с помощью чего проводится экспресс-тестирование? У пациента берут биоматериал (проводят в горле ватной палочкой). После этого палочку опускают в пробирку со специальным раствором, оставляют в нем на 1 минуту. Далее палочку вытаскивают, отживают в пробирку, после чего туда опускается тест-полоска, на 5 минут. Через это время оценивают результат.

Такое исследование не применяется повсюду, хотя оно и удобно, позволяет диагностировать инфекцию прямо в кабинете врача. Причина в том, что полоски для тестирования могут дать ложный результат. Поэтому даже если диагностика и проводилась, для уточнения диагноза все равно делают бакпосев.

Используемые биоматериалы

Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций может проводиться с применением:

• мокроты;
• носоглоточной слизи;
• гноя;
• смывов со слизистых;
• отделяемого из раны;
• мазка из влагалища;
• спермы;
• мочи;
• кала.

Конкретный тип биоматериала определяется предположительным диагнозом – если есть подозрение на воспаление мочевого пузыря, то проводится анализ мочи, а если у грудничка явные признаки кишечной инфекции (жидкий стул, высокая температура), то бактерию определяют в кале.

Расшифровка анализов

Независимо от того, сколько лет пациенту, будет это взрослых, подросток или грудной ребенок, существует определённая норма содержания стрептококка в каждом виде биоматериала.

Самая распространенная диагностика стрептококковой инфекции – бакпосев. Оценка его результатов проводится методом подсчета. В норме содержание бактерий не должно превышать 10 в 4 или 10 в 7 степени, без разницы, подсчитываются концентрации стрептококков в слюне, мазке из зева или цервикального канала.

О патологии говорит концентрация выше, чем 10 в 7. При этом неважно, высевается стрептококк Агалактика или какой-либо другой, например, стрептококк Вириданс. Чем больше отличается количество бактерий от 7 степени, тем более выражен патологический процесс.

Ориентироваться стоит на следующие референсные значения:

• отрицательный результат (нет роста бактерий) – отсутствие инфицирования;
• положительный результат со значением до 10 в 7 – бессимптомное носительство;
• положительный результат со значением более 10 в 7 – острая инфекция.

Нужно учитывать то, что на результаты исследования всегда влияет антибактериальная терапия, поэтому, если пациент принимал какие-либо препараты, об этом стоит знать. Впрочем, именно поэтому бакпосев используется для определения эффективности антибиотиков и чувствительности бактерий к ним.

Нужно ли лечение

Безусловно, если налицо воспалительный процесс, терапия необходима. В случае же носительства, которое протекает без каких-либо симптомов, необходимости в приеме антибиотиков определяется врачом исходя из количества выявленных микроорганизмов – если оно не превышает указанные выше показатели или намного ниже, можно обойтись и без лечения.

В тех случаях, когда количество бактерий приближается к верхней границе нормы, терапия проводится, особенно если существует подозрение на снижение иммунитета или существуют риски развития инфекции.