Kako zdraviti streptokokno okužbo. Testne metode za streptokokno okužbo

Rod Streptococcus, družina Streptococcaceae vključuje 21 vrst. Najpogosteje povzročajo bolezni: S.pyogenes, agalacticae, faecalis, ozelenitev (pneumoniae).

Piogeni streptokoki

Morfologija. Gr+, sferična ali ovalna. V razmazih se nahajajo v parih ali kratkih 6-8 celičnih verigah. Imajo kapsulo, vendar hialuronska kislina v njej ni antigenska. Gibljivi, ne tvorijo spor.

Streptokoke GOJIMO v hranilnih gojiščih z dodatkom glukoze, seruma ali krvi. Na površini gostih medijev tvorijo majhne (do 1 mm) brezbarvne kolonije, v tekočem mediju - rast dna in stene, medtem ko je medij prozoren. Glede na naravo rasti na krvnem agarju se razlikujejo: beta-hemolitični - okrog kolonij se oblikuje prozorno območje hemolize; alfa-hemolitična – ozka, zelenkasta cona; nehemolitično - okolje se ne spremeni.

Proizvajajo številne encime; laktaza in saharaza sta diferencialno diagnostično pomembna.

AG. Glede na AG sestavo polisahoridne celične stene (snov C) streptokoke delimo v 20 seroloških skupin (označenih z velikimi črkami latinične abecede A–V). Znotraj seroskupin se streptokoki delijo na serovarje (označene s številkami). Večina povzročiteljev steptokoknih okužb spada v serološko skupino A.

Antigenske lastnosti imajo Ig-novi Fc receptorji celične stene, lipoteihojske kisline, pa tudi toksini in encimi, ki jih mikroorganizmi izločajo v okolje med razmnoževanjem. Patogenost za človeka je določena s tvorbo toksinov, zunajceličnih encimov in lastnosti samih bakterijskih celic. Seznam bolezni, ki jih povzročajo streptokoki, je precej velik: tonzilitis, kronični tonzilitis, škrlatinka, gnojne kožne lezije, flegmon, sepsa, nefritis, revmatizem, vnetje srednjega ušesa itd. Poskusi najti diferencialne znake streptokokov, ki povzročajo tako različne bolezni kliničnih manifestacij, so bili neuspešni. Le v zvezi s škrlatinskim streptokokom je bilo ugotovljeno, da lahko izločajo eritrogeni toksin; drugi znaki so enaki kot pri drugih streptokokih SEROLOŠKE SKUPINE A. Streptokoki serovar 12, ki proizvajajo citotoksin, veljajo za nefritogene.

Seroskopska skupina streptokokov IN(S. agalactia) lahko povzroči poporodne okužbe in sepso pri novorojenčkih, erozivni stomatitis, urogenitalne okužbe pri ženskah, sepso in meningitis.

Z– povzročitelji okužb dihal, bolezni MPS.

n in TO– izoliran od endokarditisa.

D(enterokoki) - živijo v črevesju zdrave osebe, povzročajo poškodbe žolčevodov in lahko povzročijo endokarditis z vnosom gnojno-vnetne okužbe v rane. Z generalizacijo - sepso.

Nekateri (S.mutans, S.salivarius itd.), ki ne vsebujejo skupine Ag, živijo v ustni votlini. S.mutans sodeluje pri nastanku zobnega kariesa in parodontalne bolezni.

Streptokoke drugih seroloških skupin redko najdemo pri ljudeh.

Dejavniki patogenosti. Adhezini so lipidna komponenta kompleksa lipoteihojske kisline z beljakovinami celične stene, ki zagotavljajo interakcijo z epitelno membrano in kolonizacijo. Zaščito pred fagocitozo zagotavljajo:

1) antihemotaktični faktor;

2) Ig nov Fc receptor(za IgG) - zavira fagocitozo, uničuje komplement, povzroča neravnovesje imunoglobulinov;

3) kapsula(v seroskupinah A in B) – ščiti pred fagociti;

4) M beljakovine, vam omogoča rast in razmnoževanje v človeški krvi; celice brez M-proteina se fagocitirajo brez sodelovanja protiteles. M protein zagotavlja enako sposobnost prodiranja v mikrobne celice in razmnoževanja v njih.

ENCIMI: hialuronidaza (faktor širjenja) in streptokinaza (fibrinolizin) - uničuje fibrin, kar omejuje lokalno žarišče vnetja in spodbuja generalizacijo procesa.

Streptokoki SEROSKUPINE A tvorijo številne STRUPE:

O-streptolizin(toplotno labilen protein) – sprošča se med razmnoževanjem, povzroči lizo rdečih krvničk, uniči membrane drugih celic, pa tudi membrane lizosomov, ima kardiotoksični učinek. Ta toksin je antigen in stimulira sintezo anti-O-streptolizina.

S-streptolizin(nukleoprotein), nima antigenskih lastnosti, povzroča lizo rdečih krvnih celic, uničuje lizosome, mitohondrijske membrane človeških celic.

levkocidin lizira polimorfonuklearne levkocite, izklopi fagocitozo.

Citotoksini(peptidi) – poškodujejo celice. Eden od teh toksinov lahko poškoduje ledvično tkivo; izločajo ga nefritogeni sevi streptokokov serovar 12.

Eritrogeni toksin (škrlatinka). Informacije o nastanku tega toksina pridejo v celico z genomom zmernega faga. Termostabilna frakcija eritrogenega toksina stimulira odziv HRT.

Ekologija in distribucija. Obstajajo patogeni, ki povzročajo bolezni samo pri ljudeh, ljudeh in živalih, in oportunistični patogeni za ljudi. Živijo v ustni votlini, na sluznicah zgornjih dihalnih poti, na koži in v črevesju. Vir so bolniki in prenašalci bakterij. Pot širjenja je po zraku. Pomemben del bolezni predstavljajo endogene okužbe, ki se pojavljajo pri ljudeh z imunsko pomanjkljivostjo.

V okolju (na gospodinjskih predmetih, v prahu) se lahko obdržijo več dni in dobro prenesejo sušenje (ohranijo sposobnost preživetja, vendar izgubijo virulentnost). Občutljivo na vročino in razkužila.

Imuniteta. Na razvoj streptokoknih okužb vpliva stanje mikroorganizmov. Pogosto se bolezen razvije v ozadju že obstoječe preobčutljivosti (ponavljajoči se tonzilitis, erizipele, kronične okužbe - tonzilitis, nefritis, revmatizem). Možna vpletenost avtoimunskih procesov (revmatizem). Imajo hipertenzijo, ki navzkrižno reagira s sarkolemo mišičnih vlaken srca.

Protitelesa nastajajo proti vsem streptokoknim biološko aktivnim snovem (toksini, encimi). Imuniteta po okužbah (razen škrlatinke) je nizka in je značilne protimikrobne narave (na M-antigen). Protitelesa proti encimom in streptokoknim toksinom praktično nimajo zaščitnih lastnosti. Stopnjo intenzivnosti senzibilizacije preverjamo z alergološkimi testi.

Laboratorijska diagnostika. Material za BAKTERIOLOŠKO preiskavo je sluz iz žrela, gnoj, izcedek iz rane, kri itd. Izolirane čiste kulture identificiramo in določimo njihove osnovne lastnosti: morfologijo, hemolitično aktivnost, občutljivost na protimikrobna zdravila. SEROLOŠKA DIAGNOSTIKA - dokazovanje protiteles proti toksinom in encimi. Pri revmatizmu se v parnih serumih povečajo titri anti-O-streptolizinov, anti-DNaze in antihialuronidaze.

Preprečevanje in zdravljenje. Posebna preventiva ni bila razvita. Za preprečevanje kroničnih streptokoknih okužb, povezanih z obstojnostjo patogena in nastankom L-oblik, se uporablja antibiotična terapija. Za otroke, ki so imeli večkratni tonzilitis, škrlatinko, je vzpostavljeno dispanzersko opazovanje (preprečevanje revmatizma). Streptokoki seroskupine A so zelo občutljivi na penicilin (baktericidno delovanje), odpornost na penicilin ni pridobljena. Sulfonamidi imajo bakteriostatični učinek na streptokoke. Mikroorganizmi zlahka pridobijo odpornost nanje.

Zavzema posebno mesto ŠKRLATINKA– akutna nalezljiva bolezen, povzročitelj – hemolitični streptokok skupine A katerega koli serovarja, sposobni proizvajati eritrogeni toksin.

Patogeneza. Škrlatinka je zelo nalezljiva bolezen, ki se pojavlja ciklično s spreminjajočimi se simptomi. Na stopnji 1 se kaže učinek eritrogenega toksina (zastrupitev, vneto grlo, izpuščaj na hiperemičnem ozadju).

2. obdobje spremljajo zapleti zaradi delovanja sebe streptokoki (gnojni limfadenitis, mastoiditis, otitis), ker protimikrobna imunost ni izražena in okužba s streptokoki drugih serovarjev, za katerega ni ustreznih protiteles.

Imuniteta. Za razliko od drugih streptokoknih okužb ostaja močna antitoksična imunost, ker eritrogeni streptokokni toksin vsi serovarji AG je enak. Protimikrobna imunost tipsko specifičen in ne ščiti pred pojavom drugih streptokoknih bolezni.

Intenzivnost antitoksične imunosti na eritrogeni toksin preverjamo z intradermalnimi testi. V odsotnosti imunosti najmanjši odmerek toksina povzroči pordelost in otekanje kože. Če so v krvi antitoksini, ni reakcije na vnos toksina.

Streptococcus pneumoniae (PNEUMOCOCCUS). S.pneumoniae - povzroča pljučnico - pljučnico, kar je razloženo s specifičnostjo adhezinov, ki delujejo z receptorji pljučnih celic.

Morfologija, fiziologija. Imajo podolgovato obliko, ki spominja na plamen sveče. Razporejeni so v parih, vsak par je obdan s kapsulo. Pod kapsulo je M-protein, ki je po lastnostih podoben S.pyogenes, vendar ima svojo antigensko specifičnost.

Na trdnih hranilnih gojiščih, ki jim je dodan serum ali kri, rastejo pnevmokoki, ki tvorijo majhne kolonije, obdane z zelenim pasom (na krvnem agarju). V tekočem mediju proizvajajo enakomerno motnost.

BH aktivnost je zmerna - razgradijo številne ogljikove hidrate in tvorijo hialuronidazo, muromidazo, peptinazo.

Imejte 3 glavne AG: polisaharidni antigen celične stene, kapsularni antigen in M ​​protein. Glede na kapsularno hipertenzijo jih delimo na 84 serovarjev.

Ekologija in distribucija. Živijo v zgornjih dihalih človeka, preidejo v spodnja dihala in ob zastoju v pljučih, zmanjšani aktivnosti SIgA in makrofagov ter uničenju surfaktanta pride do endogene pljučnice. Okužba s kapljicami v zraku.

Zunaj telesa pnevmokoki hitro umrejo. Ne prenesejo segrevanja ali razkuževanja. Posušen izpljunek lahko traja dolgo časa. Občutljivost na penicilin, makrolide.

Patogenost. Proizvajajo hemolizine in levkocidin, ki poškodujejo tkivne celice. M protein in kapsula zagotavljata sposobnost adhezije in odpornost proti fagocitozi. Pri razvoju patološkega procesa imajo veliko vlogo sproščeni encimi: peptidaza razgradi SIgA hialuronidaza spodbuja širjenje mikroorganizmov v tkivih. Ko so izpostavljeni toksinom in encimom, lahko makrofagi pod površinsko aktivno snovjo zapustijo "obrambno črto". Možna je generalizacija procesa, ki se pogosteje pojavlja pri majhnih otrocih in starejših. V teh primerih pride do meningitisa in sepse.

Imuniteta. Tipsko specifičen in nestabilen, to pojasnjuje ponovni pojav in možnost prehoda v kronično obliko.

Laboratorijska diagnostika. Za izolacijo patogenih celic so potrebni: optimalen hranilni medij za razmnoževanje, pogoji gojenja in pravilno zbiranje testnega materiala. Izolirane celice prepoznamo po številnih značilnostih in jih ločimo od viridanskega (alfa-hemolitičnega) streptokoka in enterokoka. Pnevmokoke s kapsulo podvržemo serološki tipizaciji in določimo občutljivost mikroorganizmov na protimikrobna zdravila.

Preprečevanje in zdravljenje. Posebna preventiva ni bila razvita. V vsakem posameznem primeru so pomembni nespecifični ukrepi, namenjeni preprečevanju možnosti endogene okužbe: pri bolnikih, ki so prisiljeni dolgo ležati, ki so na hormonski terapiji, obsevanju in ob zmanjšanju splošne odpornosti telesa. , spodbujajo se naravni obrambni mehanizmi (prehrana, vitaminski dodatki, krepitev prezračevanja pljuč z masažo in drugimi vplivi). Za zdravljenje pljučnice se uporabljajo penicilinski in makrolidni antibiotiki.

ENTEROKOKI. S.faecalis (fekalni streptokoki, enterokoki) so prebivalci črevesja ljudi in toplokrvnih živali. So del skupine D .

Morfološko- To so sferične ali ovalne bakterije, ko se delijo, tvorijo pare ali kratke verige. Polimorfni, nekateri sevi so gibljivi, imajo 1–4 flagele.

Fermentacija posameznih ogljikovih hidratov je spremenljiva značilnost.

Ekologija in distribucija. Enterokoki so bolj odporni na dejavnike okolju kot drugi streptokoki. Zdržijo segrevanje do 60 °C 30 minut in se lahko razmnožujejo v gojiščih s 6,5 % NaCl, 40 % žolča, pri pH 9,5–10,0. Kalijev telurit, natrijev azid, žolčne soli, kristalno vijolično, nalidiksična kislina, pa tudi penicilin in neomicin ne zavirajo rasti enterokokov, ki se uporabljajo za ustvarjanje selektivnih gojišč.

Patogeneza. V živilih se lahko razmnožujejo, ko se zaužije okužena hrana, se razvije bolezen, ki se prenaša s hrano. Najpogosteje jo povzročajo proteolitične različice.

Gnojno-vnetni procesi običajno potekajo počasi, kronično. Pogosteje ne gre za monoinfekcijo, ampak za mešano, v povezavi z Escherichio coli, Proteusom in stafilokoki. Hemolitične različice S.faecalis so izolirane iz gnoja, izcedka iz ran in zgornjih dihalnih poti, kjer so lokalizirani patološki procesi. Večina sevov enterokokov, izoliranih od bolnikov, se izkaže za odporne na penicilin, neomicin in imajo encime patogenosti - koagulazo. , hialuronidaza, DNaza, fibrinolizin, proteinaza, muromidaza. Pri subkulturi v laboratoriju se ti encimi običajno prenehajo sproščati

> Izpit za streptokokna okužba

Teh podatkov ni mogoče uporabiti za samozdravljenje!
Potreben je posvet s strokovnjakom!

Obstaja več vrst streptokokov, ki povzročajo vnetne procese v človeškem telesu. Posebno nevarna je bakterija beta-hemolitični streptokok, ki živi v nazofarinksu, prebavilih in nožnici. Obstajajo trije serovarji (podvrste). Streptokoki serovarja 1a in III živijo predvsem v dihalih in centralnem živčnem sistemu. Pri novorojenčkih lahko povzročijo meningitis in pljučnico, zato so nosečnice pri 35 tednih predpisane preiskave za identifikacijo teh mikroorganizmov. Beta-hemolitični streptokok skupine A živi predvsem na koži in sluznicah. Povzroča vnetje in proizvaja številne toksine (hemolizin, streptolizin itd.), lahko povzroči tonzilitis, faringitis, pa tudi invazivne bolezni (miozitis, endokarditis itd.), škrlatinko in celo toksični šok.

Med laboratorijskimi metodami za identifikacijo streptokokov se uporablja PCR testiranje (odkrivanje DNK patogena). Material za študijo je krvna plazma, ostružki epitelijskih celic orofarinksa, sline, sputuma, izpiranja in tekočine, odvzete iz pljuč (lavaža). Izbira vrste biomateriala za raziskavo opravi zdravnik glede na pričakovano kolonizacijo streptokokov.

Za potrditev streptokokne narave bolezni, učinkovito predpisovanje zdravljenja in potrditev okrevanja se izvaja kultura materiala za odkrivanje beta-hemolitičnih streptokokov, čemur sledi določitev njihove občutljivosti na protimikrobna zdravila.

Izvajajo se tudi posebni antigenski testi za identifikacijo streptokokov skupine A in B. Za identifikacijo streptokoka A s to metodo se bolniku vzame bris iz orofarinksa za analizo.

Indikacije za testiranje na streptokoke

Zdravniki predpišejo krvni test za odkrivanje streptokokne DNK za septične bolezni, meningitis in akutne faze pljučnice. PCR testiranje ostankov epitelija orofarinksa, sputuma, izpiranja in izpiralne tekočine se izvaja pri dolgotrajnem mokrem kašlju, ki ga spremlja vročina, bronhitis, tonzilitis, faringitis, rinosinusitis. Testi za streptokoke so indicirani za bolnike z bronhopulmonalnimi boleznimi zaradi zmanjšane imunosti, nosečnice, zdravstveni delavci za registracijo osebnega zdravstvenega kartona.

Porodničarji-ginekologi, pediatri, terapevti, nevrologi, pulmologi in kirurgi predpisujejo teste za odkrivanje prisotnosti streptokokov. Raziskave se izvajajo tako v multidisciplinarnih bolnišnicah kot v številnih plačanih laboratorijih.

Priprave na študij

Pred začetkom zdravljenja z antibiotiki je priporočljivo opraviti test. Pred izvajanjem diagnostičnih in terapevtskih ukrepov na teh območjih je treba opraviti zbiranje sline, sputuma, izpiranj, izpiralne tekočine in materiala iz orofarinksa. Piti in jesti morate najkasneje 2-3 ure pred zbiranjem materiala iz orofarinksa.

Interpretacija rezultatov testa

Laboratorij izda rezultate PCR testa in antigenskih testov na prisotnost streptokokov skupine A in B v obliki »ugotovljeno« ali »ni ugotovljeno«. Negativen rezultat najpogosteje kaže na odsotnost okužbe, manj pogosto - na nezadostno koncentracijo patogena ali njegovih antigenov v vzorcu biomateriala. Običajno v pregledanih tkivih ne bi smeli odkriti niti DNK streptokoka niti njegovih antigenov. Prenašalci streptokokov pa so lahko tudi zdravi ljudje.

Če se med kulturo odkrije rast beta-hemolitičnih streptokokov skupin A in B, zdravnik navede vrsto mikroorganizmov, število zraslih kolonij in njihovo občutljivost na določena zdravila. Običajno ne sme biti rasti streptokokov.

Za lokalne kapljične streptokokne okužbe je material za raziskave sputum, nazofaringealna sluz, gnoj, izpiranje, izcedek iz ran; za običajne oblike infekcijskega procesa - kri in urin.

Za laboratorijsko analizo se uporabljajo mikroskopske, bakteriološke in serološke diagnostične metode.

Namen, značilnosti in diagnostična vrednost mikroskopskega pregleda so enaki kot pri stafilokoknih okužbah.

1. BAKTERIOLOŠKA ŠTUDIJA

Za izolacijo čiste kulture streptokokov je pomembno ustvariti optimalen hranilni medij, saj imajo streptokoki zanj posebne zahteve. Potrebujejo veliko količino ogljikovih hidratov in naravnih beljakovin. Zato se za streptokokne okužbe poleg splošno sprejetih sladkornih MPB, krvnih MPA, mlečno-solnih MPA in MPB (glejte recepte zgoraj) uporabljajo ascitični in serumski mediji.

ASCITICA MPB in MPA pripravimo z dodatkom poročevalne tekočine, pridobljene sterilno iz trebušne votline medicinskih in kirurških bolnikov. Tekočino segrevamo 3 dni pri +56-58 °C 1 uro, steriliziramo s filtracijo skozi Seitz filter ali dodamo 40% glicerol in shranimo na hladnem. Za pripravo ascitne juhe in ascitesnega agarja 1 del tekočine zmešamo z 2-3 deli MPB (ali Hottingerjeve juhe) ali stopljenega in ohlajenega MPA.

WHEY MPB je pripravljen iz preproste sveže mesno-peptonske juhe s pH 7,6, 1 delu katere dodamo 2 dela svežega človeškega ali konjskega seruma. Serum se 30 minut inaktivira pri + 56 °C, preden se doda v gojišče.

Kadar so kapljične streptokokne okužbe zapletene s sepso, je potrebna tudi hemokultura. Za bakteriološko preiskavo krvi E. G. Kassirskaya priporoča kompleksno uporabo treh vrst hranilnih substratov, inokuliranih s hitrostjo 1 dela patološkega materiala na 10-15 delov medija. Slednji uporablja 0,2 % poltrdni agar z 10 % ascitne tekočine, Levinthalovo juho s krvjo in Kitt-Tarozzijevo jetrno gojišče.

ZA LEVINTHAL JUHO posebej pripravite naslednje komponente: št. 1 - na 100 ml. mleto meso dodajte 300 ml destilirane vode in 10 ml običajne raztopine sode; št. 2 - 0,5 g pankreatina raztopimo v 20-30 ml vode z 2 ml 1 N raztopine sode in 10 ml kloroforma; št. 3 - puferska raztopina natrijevega fosfata v destilirani vodi (razredčena 8:1000). Z raztopino HCl naravnamo pH na 5,6-6.

Prvi dan mešanico št. 1 inkubiramo v termostatu pri + 37 ° C 1-2 uri, ji dodamo raztopino št. 2, premešamo in hranimo pri enakih pogojih še 24 ur. Posoda z medijem se občasno pretresa. Nato vzemite enake količine mesne pulpe in pufrske raztopine št. 3. Zavremo in filtriramo. Nastavite pH na 7,2-7,4. Ponovno zavrejo. Nalijemo v epruvete in steriliziramo 2 dni zaporedoma po 30 minut s tekočo paro.

KITT-TAROZZI MEDIUM je narejen iz govejih jeter ali mesa. Slednje narežemo na kose, stehtamo, prelijemo s trojno količino MPB (pH-7,4-7,6) in kuhamo 30 minut. Nato juho filtriramo in koščke jeter speremo z vodo iz pipe. Nato epruvete s 3-4 kosi jeter, napolnjene s 7-8 ml filtrata in plastjo vazelinskega olja, steriliziramo pod tlakom 1 atm. v 30 minutah.

Pojavnost streptokokov se bo povečala pri uporabi POLTEKOČEGA GAROZZI AGARJA: Martinovi brozgi (pH-7,6-7,8) dodamo 0,3-0,5% glukoze in 0,1-0,15% agar-agarja. Kose jeter ali kuhanega mesa damo v sterilne epruvete, dodamo 9 ml gojišča in steriliziramo pri +120 °C 30 minut.

Viridans streptococcus, izoliran pri septičnem endorkarditisu, se razvija zelo počasi. V zvezi s tem se krvne kulture hranijo v termostatu 2-3 dni.

V nekaterih primerih ni mogoče izolirati streptokokne kulture z obsežnim prezračevanjem. Uspešnejša je uporaba anaerobioze. Za ustvarjanje slednjega lahko uporabite tri najpreprostejše metode.

I. MATERIAL, KI GA JE TESTIRANJE, VSEJEMO V EEPEKVETO z 0,25 % glukozno brozgo in ga hitro posesamo v sterilne Pasteurjeve pipete, katerih konce takoj zapremo nad plamenom gorilnika. Pipete so nameščene navpično v termostat. Po 24 urah se spodnji konci pipet odlomijo (streptokoki rastejo samo na dnu), prve kapljice se uporabijo za mikroskopiranje in nadaljnjo izolacijo čiste kulture povzročitelja.

2. GODITEV PRIDELKOV V Z OGLJIKOVIM DIOKSIDOM NASIČENEM OZRAČJU. Zahtevano koncentracijo CO 2 dobimo tako, da v eksikator, napolnjen z epruvetami, najprej dodamo 1 g sode bikarbone na 1 liter prostornine, nato pa iz istega izračuna še 8-9 ml 10 % H 2 SO 4 oz. HCl.

3. PRECEJ PREPROSTA in manj učinkovita je naslednja tehnika: na dno ohlapno zaprtega eksikatorja postavite prižgano svečo. Gori 1-3 minute in ugasne. Na koncu prvega ali drugega postopka se eksikatorji pokrijejo s pokrovi, katerih robovi so namazani z vazelinom in postavljeni v termostat.

Izolacija čiste kulture

Biokemična aktivnost streptokokov je spremenljiva in njeno določanje nima diagnostične vrednosti. Študija streptokokov v zvezi s tem se uporablja samo za razlikovanje od enterokokov (tabela 1).

Sestava diferencialnih diagnostičnih medijev, ki se uporabljajo v ta namen, je naslednja.

• ŽOLČNA IN ŽOLČNO-KRVNA MPA D. Z. Belenky in N. N. Popova pripravimo iz stopljenega in filtriranega 3% MPA s poljubno jušno osnovo. 60 ml te MPA dodamo 40 ml nativne filtrirane žolce, nalijemo v steklenice in steriliziramo pri tlaku 1 atm. 30 minut. Za pripravo krvnega agarja se tej žolčni MPA doda 5 % defibrinirane krvi.
• MLEKO Z METILENSKO MODRO pripravimo iz posnetega sterilnega mleka, ki mu v 100 ml dodamo 2 ml 10% vodne raztopine metilenskega modrega.

DOLOČANJE VIRULENCE STREPTOKOKOV

Za dokaz patogenosti streptokokov so pomembni hialuronidazna aktivnost, dokaz streptokinaze ali fibrinokinaze, plazmakoagulaze, levkotoksični učinek streptokokov in prisotnost hemolizina. Določitev teh indikatorjev se izvaja z zgoraj opisanimi metodami, vendar je odkrivanje hemolizne aktivnosti streptokokov bolje na medijih s človeško krvjo.

DOLOČANJE LEUKOCIDINA. Vzamemo citronsko kri človeka ali živali, jo centrifugiramo, s pipeto odsesamo zgornjo rumeno plast levkocitov, prenesemo v drugo epruveto in pripravimo 2-5% suspenzijo levkocitov. Slednjega vlijemo v 1-1,5 ml v ozke epruvete. Tu dodamo tudi 1 zanko 1-2 milijardi dnevne kulture streptokoka in postavimo v termostat na +37 °C za 1 uro. Po inkubaciji iz levkocitno-mikrobne mase naredimo brise (podobno kot brise iz polne krvi), jih posušimo in fiksiramo 15 minut. v mešanici Nikiforova, obarvan 45-60 minut po Romanovsky-Giemsa, mikroskopsko. Masivno uničenje levkocitov kaže na prisotnost levkocidina.

DOLOČANJE OBČUTLJIVOSTI izoliranih kultur na zdravilne učinkovine poteka po splošno sprejetih metodah.

SEROLOŠKA TIPIZACIJA odkritih streptokokov po njihovi izolaciji je potrebna le za posebne epidemiološke namene in se redko uporablja.

II. SEROLOŠKA METODA ZA DIAGNOSTIKO STEPTOKOKNIH OKUŽB

Encimi streptokokne virulence (hialuronidaza, fibrinokinaza, plazmakoagulaza) in njihovi toksini (na primer hemotoksin) so močni antigeni, v odgovor na katere se proizvajajo ustrezna protitelesa: antihialuronidaza, antistreptokinaza, antistreptolizin itd. Z odkrivanjem teh protiteles se bolezen in faza razvijeta. je mogoče diagnosticirati razvoj nalezljivega procesa.

DOLOČANJE ANTISTREPTOLIZINA (ANTIHEMOLIZINA)

Streptolizin je vrsta hemotoksina. Njegovo prisotnost se preverja na rdečih krvničkah. Kot odgovor na delovanje tega antigena se v telesu tvorijo protitelesa, ki lahko nevtralizirajo njegovo hemolizno aktivnost. Pri odkritju antistreptolizina je potrebno: bolnikov serum z antistreptolizinom (protitelesa); streptolizin (prečiščen), standardni, liofiliziran; 5% suspenzija kunčjih, ovčjih ali človeških rdečih krvničk; fosfatni pufer za redčenje serumov in pripravo suspenzije eritrocitov: v 1 litru destilirane vode raztopimo 7,6 NaCl, 3,17 g KH 2 P0 4 in 1,81 g Na 2 HPO 4, po kapljicah dodamo koncentriran NaOH in uravnamo pH na 6,5-6,7. . Pufersko raztopino hranimo v hladilniku pri -4 °C 2-3 tedne.

Določanje antistreptolizina je sestavljeno iz dveh stopenj: prva je določitev titra in delovnega odmerka standardnega streptolizina, druga pa je identifikacija in kvantitativna določitev antistreptolizina. Sheme za njihovo izvedbo so podane spodaj.

Titer in delovni odmerek streptolizina se štejeta za njegovo najmanjšo količino, ki daje jasno hemolizo rdečih krvnih celic. V tem primeru so 1,0 ml.

IN Zadnje čase Proizveden je standardni liofiliziran stretolizin, steklenica s katerim in priložena navodila kažejo na način redčenja zdravila za pridobitev delovnega odmerka. Ta streptolizin zagotavlja dobro ponovljivost rezultatov.

V tem vzorcu seruma preiskovanega bolnika smo dokazali antistreptolizin v titru 1:200.

DOLOČANJE ANTIHIALURONIDAZE

Princip detekcije temelji na beleženju destruktivnega delovanja encima hialuronidaze na hialuronski substrat. Protitelesa v pacientovem serumu, usmerjena proti temu encimu, ga nevtralizirajo in hialuronska kislina ostane nespremenjena.

Potrebni reagenti: bolnikov serum s protitelesi (antihialuronidaza); izvleček hialuronske kisline z znanim delovnim odmerkom (metoda opisana zgoraj); hialuronidaza (kemično čisto zdravilo); 15% ocetna kislina - indikator; fiziološka raztopina.

Določanje antihialuronidaze je sestavljeno iz treh stopenj: prva - določanje titra in delovnega odmerka hialuronske kisline, druga - hialuronidaza, tretja - ugotavljanje prisotnosti in titra antihialuronidaze.

Titracija hialuronskega substrata je opisana zgoraj. Titer in delovni odmerek standardne hialuronidaze ustrezata minimalni količini, ki lahko uniči hialuronsko kislino, vzeto v delovnem odmerku.

Po določitvi titra hialuronidaze določimo titer antihialuronidaze.

V tem primeru je titer antihialuronidaze v bolnikovem krvnem serumu 1:200. Ta količina protiteles pri določeni razredčitvi seruma še vedno deluje nevtralizirajoče proti hialuronidazi in preprečuje uničenje hialuronske kisline. Njegovo celovitost zabeležimo s tvorbo strdka po dodajanju indikatorja - 15% raztopine ocetne kisline.

1. Dyachenko S.S. Mikrobiološke metode za diagnosticiranje nalezljivih bolezni. Državna medicinska založba Ukrajinske SSR, str.
2. Vodnik po mikrobiologiji, klinični praksi in epidemiologiji nalezljivih bolezni. Ed. "Medicina", letnik VI, oddelek. VI, str. 440-474, 489-500 (enterokoki).
3. Vodnik za mikrobiološko diagnozo nalezljivih bolezni, ed. K. I. Matveeva in M. I. Sokolova, str.
4. Sachkov V.I. Imunološke metode za preučevanje revmatizma in drugih kolagenskih bolezni. Medgiz, M., 1962.
5. Ioffe M. F. Imunologija revmatizma. Medgiz, M., 1961.

Vir: Motavkina N.S., Pyanova R.E. Mikrobiološka diagnostika nekaterih kapljičnih okužb in toksoplazmoze. Metodološki razvoj za študente. VSMU, 1973

Nalezljive bolezni povzročajo različni mikroorganizmi, med katerimi velik delež zavzemajo bakterije. Zlasti streptokoki. To so sferične, gram-pozitivne, anaerobne bakterije, ki živijo predvsem na človeških sluznicah. V mnogih primerih je predpisana analiza za streptokokno okužbo; to je edini način za identifikacijo patogena, če sumite na bakterijski vzrok bolezni.

V katerih primerih se izvaja diagnoza? Najprej za vneto grlo in faringitis, nekatere druge bolezni zgornjih dihalnih poti. Bakterije odkrijejo nalezljive bolezničrevesja, v nekaterih primerih z okužbo mehkih tkiv, kosti, sepse.

Poleg tega je predpisana laboratorijska diagnostika streptokoknih okužb, če obstaja sum na bakterijsko prenašalstvo; od zaposlenih v zdravstvenih ustanovah se vzamejo ostružki.

V primeru bolnišnične okužbe je obvezna preiskava na streptokoke in ugotavljanje drugih patogenih bakterij.

Med zdravljenjem z antibiotiki se izvajajo tudi testi za oceno učinkovitosti terapije. Kot preventivni ukrep se lahko pred hospitalizacijo predpiše pregled.

Diagnostične metode

Danes lahko za identifikacijo povzročitelja uporabimo različne študije. Najpogosteje uporabljene metode so:

• bakteriološki;
• serološki;
• hitro testiranje;
• PCR diagnostika.

Vsaka od teh metod ima svoje posebnosti in zmožnosti, čeprav so glede natančnosti vse enako informativne.

Bakteriološka metoda

Imenuje se tudi setev. Med študijo se biomaterial, odvzet bolniku, postavi v petrijevko s hranilnim medijem - mešanico ogljikovih hidratov in naravnih beljakovin. Za setev se uporabljajo tri različni tipi substrat, od katerih je vsak primeren za določeno vrsto bakterij.

Nato se petrijevke postavijo v poseben termostat in tam hranijo določen čas. Po tem se preuči rezultat - na hranilnem mediju se oblikujejo kolonije bakterij. Praviloma streptokoki tvorijo okrogle kolonije, ki so lahko mat, sijoče ali sluzaste – odvisno od skupine bakterij.

Takšna analiza se izvaja za izolacijo posameznega patogena iz skupine - navsezadnje vsak biomaterial vsebuje veliko mikroorganizmov, patogenih ali ne. Jasno je, da če je največ kolonij streptokokov, potem je bolezen posledica tega.

Vrsta bakteriološke analize je anaerobioza. Biomaterial se postavi v epruveto s hranilno juho, vendar brez kisika. V teh pogojih se lahko razvijejo samo anaerobne bakterije, ki vključujejo streptokoke. Prednost je v tem, da se takoj izločijo vsi aerobni mikroorganizmi, kar poveča natančnost diagnoze in jo večkrat poenostavi.

Serološka metoda

Uporablja se tudi za ugotavljanje okužbe s streptokokom, vendar se ne upošteva količina povzročitelja, temveč količina protiteles proti njemu. Kot veste, človeško telo proizvaja protitelesa proti vsem mikroorganizmom, ki odpravljajo nevarnost. Več kot jih je v krvi, več je bakterij. Na tem temelji serološko testiranje.

Pri streptokoku ugotavljamo količino protiteles proti streptolizinu tipa O, ki ga te bakterije izločajo. Prav ta snov povzroča uničenje celic človeškega telesa.

Glede na odkrito število protiteles lahko razumete ne le vzrok bolezni, temveč tudi resnost vnetnega procesa - več jih je, več je streptokokov v telesu.

PCR

Okrajšava pomeni verižno reakcijo s polimerazo. To je relativno nova metoda, ki slovi po svoji natančnosti. Študija temelji na identifikaciji specifičnih fragmentov streptokokne DNA. Če študija razkrije zaporedje genov, ki je značilno za ta določen patogen, ni dvoma.

Kako je to mogoče? PCR večkrat naredi kopije DNK z uporabo encima DNK polimeraze. V tem primeru je mogoče identificirati povzročitelja v najzgodnejših fazah bolezni in določiti njegovo količino v biomaterialu. Metoda je resnično informativna, v tem pogledu je boljša od vseh drugih.

Pomanjkljivost verižne reakcije s polimerazo je višja cena analize, ki pa jo odtehta izjemna natančnost, ki je v mnogih primerih kritična.

Hitra diagnoza

Če je treba test na streptokoke opraviti hitro, kar je v mnogih primerih potrebno, bi bila najboljša možnost odvzem brisa, ki bi mu sledila hitra diagnoza. Omogoča vam postavitev diagnoze v 5 minutah in ne povzroča resnih nevšečnosti.

Kako in s kakšno pomočjo poteka hitro testiranje? Biomaterial se vzame od bolnika (v grlu z vatirano palčko). Nato palico potopimo v epruveto s posebno raztopino in pustimo v njej 1 minuto. Nato palico izvlečemo, damo v epruveto, nato pa testni trak spustimo tam 5 minut. Po tem času se rezultat oceni.

Ta test se ne uporablja povsod, čeprav je priročen in vam omogoča, da diagnosticirate okužbo kar v zdravniški ordinaciji. Razlog je v tem, da lahko testni lističi dajo napačne rezultate. Torej, tudi če je bila diagnostika opravljena, se še vedno opravi bakterijska kultura za razjasnitev diagnoze.

Uporabljeni biomateriali

Mikrobiološko diagnozo streptokoknih okužb lahko izvedemo z:

• sputum;
• nazofaringealna sluz;
• gnoj;
• izpiranje iz sluznice;
• izcedek iz rane;
• vaginalni bris;
• sperma;
• urin;
• blato

Posebna vrsta biomateriala je določena z domnevno diagnozo - če obstaja sum vnetja mehurja, se opravi test urina in če ima otrok očitne znake črevesne okužbe (ohlapno blato, visoka temperatura), potem bakterije se določijo v blatu.

Interpretacija analiz

Ne glede na to, koliko je bolnik star, pa naj bo odrasel, najstnik oz dojenček, obstaja določena norma za vsebnost streptokokov v vsaki vrsti biomateriala.

Najpogostejša diagnoza streptokokne okužbe je bakterijska kultura. Njeni rezultati se ocenjujejo z metodo štetja. Običajno vsebnost bakterij ne sme preseči 10 do 4 ali 10 do 7 stopinj, ne glede na to, ali se izračuna koncentracija streptokokov v slini, brisu iz žrela ali cervikalnem kanalu.

Patologijo kaže koncentracija, višja od 10 v 7. Ni pomembno, ali je posejan streptokok Agalactica ali kateri koli drug, na primer streptokok Viridans. Bolj kot se število bakterij razlikuje od stopnje 7, bolj izrazit je patološki proces.

Osredotočiti se morate na naslednje referenčne vrednosti:

• negativen rezultat (ni rasti bakterij) – ni okužbe;
• pozitiven rezultat z vrednostjo do 10 v 7 - asimptomatski prevoz;
• pozitiven rezultat z vrednostjo več kot 10 proti 7 – akutna okužba.

Upoštevati je treba, da na rezultate študije vedno vpliva antibakterijska terapija, zato je vredno vedeti o tem, če je bolnik vzel katero koli zdravilo. Vendar se zato bakterijska kultura uporablja za ugotavljanje učinkovitosti antibiotikov in občutljivosti bakterij nanje.

Je zdravljenje potrebno?

Seveda, če obstaja vnetni proces, terapija je nujna. V primeru prevoza, ki poteka brez kakršnih koli simptomov, potrebo po jemanju antibiotikov določi zdravnik glede na število ugotovljenih mikroorganizmov - če ne presega zgornjih kazalcev ali je veliko nižje, lahko storite brez zdravljenja.

V primerih, ko se število bakterij približa zgornji meji normale, se izvaja terapija, zlasti če obstaja sum na zmanjšano imunost ali obstaja tveganje za nastanek okužbe.